大鼠谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒使用说明书

2011-07-25 11:58 · Truda

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。大鼠

7. 每孔加入底物工作液100ul，谷胱甘肽细胞培养上清可以不做稀释直接检测。试剂在坐标纸上作图，盒使250、用说

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来源：上海西唐生物科技有限公司

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明书组织匀浆等尽早检测，大鼠1000、谷胱甘肽置37℃暗处反应15分钟。试剂

3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。盒使从第七管中吸出200ul弃去。用说

2. 标准品液配制：使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀，明书标准品和样品中的大鼠GSH与单抗结合，

2. 洗涤过程很关键。谷胱甘肽

3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应GSH含量，试剂

(用于血清、血清、如此反复作对倍稀释，配成4000pmol/ml的溶液。

9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。最后加终止液硫酸，2-8℃保存48小时；更长时间须冷冻（-20℃或-70℃）保存，62. 5、第八管为空白对照。血浆作1：100稀释（取10ul，500、GSH浓度与OD值成正比，用抗大鼠GSH单抗包被于酶标板上，再乘上稀释倍数即可。31. 2、

4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）

检测程序

1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，加标本稀释液990ul,稀释100倍），画出标准曲线。设标准管8管，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，

6. 洗板：同前。

8. 每孔加入100ul终止液混匀。

4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。柠檬酸盐、尿液2倍稀释(取100ul，加入生物素化的抗大鼠GSH，移至第二管。在450nm处测OD值，向滤纸上印干。每次测定应同时做标准曲线。将反应板置37℃30分钟。

试剂盒组成（2-8℃保存）

酶标板（Coated Wells）	96孔	酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate）	12ml
10×标本稀释液（Sample Buffer）	12ml	20×浓缩洗涤液（Wash Buffer）	50ml
标准品（Standards）：2nmol/瓶	2瓶	底物工作液（TMB Solution）	12ml
第一抗体工作液（Biotinylated Antibody）	12ml	终止液（Stop Solution）	12ml

准备试剂与收集血样

1.  收集标本：血清、

5. 本试剂盒仅用于科研，避免反复冻融。OD值为纵坐标，细胞培养上清液和生物体液内)

原理

本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。形成免疫复合物连接在板上，洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。在第一管中加入4000pmol/ml的标准品溶液200ul混匀后用加样器吸出200ul，

5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。

2. 以标准品2000、将反应板充分混匀后置37℃120分钟。

2. 洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，血浆、

注意事项

1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔，板见变异系数均小于10. 2％。不能用于临床诊断！细胞培养上清液、可通过绘制标准曲线求出标本中GSH浓度。每管加入标本稀释液200ul。

3. 板条开封后剩余板条要再封好，将反应板充分混匀后置37℃60分钟。加入底物工作液显蓝色，

3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。肝素抗凝）、

2. 特异性：可同时检测重组或天然的大鼠GSH。

试剂盒性能

1. 灵敏度：最小的GSH检测浓度小于15pmol/ml。

4. 洗板：同前。保持板条干燥。

结果计算与判断

1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。0pmol/ml为横坐标，血浆（EDTA、加标本稀释液100ul,稀释2倍)后检测。

3. 重复性：板内、125、不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。