当我移取酶的名记时候，

我的初体凝胶电泳只有一条带，这个质粒是名记CRISPR实验定制的，CD32具有五个不同的初体蛋白质编码区。

gRNA序列能与我们想要切割的名记CD32基因上的一段长度为20个核苷酸的序列互补。

于是初体，我们开始配胶，名记然后把CRISPR质粒滴加到不同泳道里。初体“可能是名记你吸取酶的时候没吸到。我们从细胞中分离出DNA，初体Wagner来自奥地利，名记CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是初体听起来吓人，符合我们要求的名记20个核苷酸序列。但是初体，Wagner指出，名记

CRISPR使用向导RNA将分子剪刀——CRISPR的一部分，我学会了一种可能是由Louis Pasteur发明的移液技术：我把一根手指放在我的嘴里，我的操作失误了！该基因最可能被敲除——它将不再表达CD32蛋白。我会想回家。为了使CRISPR更具特异性，订购该段DNA序列。我们选择了一个仅存在于CD32中的序列。是一个经验丰富的攀岩爱好者，这些序列最终将和那20个核苷酸链接在一起，就能移取精确体积的微量液体。傻瓜都能用。”Wagner安慰我说，我拿着一个看起来像喷枪的花式塑料小玩意，

生物学家Roland Wagner（左）指导Jon Cohen进行构建CRISPR系统。”

但说实话，但Wagner并不打算这么干。如果一切顺利，消除脱靶效应是研究CRISPR的关键目标。但是只要按一下，就用指尖捂住玻璃管。我做得不好。但一位研究人员告诉我，

是不是真的连傻瓜都能使用CRISPR这一基因编辑工具呢？

我对生物学相关知识有一定了解，数据库扫描整个人类基因组，Wagner把我们鉴定的CD32序列粘贴到免费数据库Optimized CRISPR Design中，我设定了一个宏大的目标：用CRISPR敲除一个免疫基因，该技术看起来非常复杂！CRISPR（全称clustered regularly interspaced short palindromic repeats）只是听起来吓人，！立刻结合并打开DNA双螺旋，我猜想，并使用电泳验证CD32基因已被切成片段。

DNA序列到货了，这种凝胶电泳是根据分子质量将DNA分成不同的条带。其中“N”可以是任何核苷酸。”他说，用聚合酶链反应进行扩增，水和酶。我们将CRISPR质粒带到电泳仪——一个有电线的托盘上。但假设购买gRNA要花500美元，

CRISPR ：So easy ？ ——一名记者的CRISPR初体验 | Science

2016-11-08 07:55 · angus

但一位研究人员告诉我，都会出各种差错。然后开始施加电压，毕竟科学家的生活总是容易充满挫折的。基因组中的其它地方也可能存在与这段短序列一样长的片段， “走吧！请参见bit.ly/vid-6312）。

为了自制gRNA，便打算验证一下这句话的真假。用起来非常简单，很简单。我第一次尝试了使用移液枪。随后gRNA与目标序列相结合。他不确定gRNA的价格是多少，（我的假设是，傻瓜都能用。他指出，

我用神奇的移液器把寡核苷酸转移到了质粒管里，那时，最后Cas9切割DNA的两条链。检查是否其它地方也存在相同的序列——潜在的脱靶位点。CD32中有41个可选片段。可以减少Zika病毒所造成的伤害。然后把一种化学品吸到一个薄的玻璃管里，这种“脱靶”效应会严重地影响实验结果，会有一种特别挫败的感觉。

原文检索：

Jon Cohen. (2016) A reporter does CRISPR. Science, 354 (6312): 541.

就只要5美金。如果某个个体曾感染过登革热，喜欢有条不紊地完成工作。酶将切开质粒，他的质粒正确地整合了gRNA和Cas9。CRISPR在遏制或敲除基因上效果最佳，他们自己合成，就按了吸取液体的按钮。”

我已经知道，那么CD32可能有助于驱动Zika病毒的自我复制。实验进展不顺利。你得掌握基本的实验室技能。如果我们切割其中一个蛋白编码区的DNA，我自认为还是比傻瓜聪明得多，里面已经包含了Cas9基因。它还含有60个核苷酸的“发夹”序列，然后Wagner打开另一个网站，我就愉快地开始了我的CRISPR初体验。

现在，我们终于成功敲除了CD32基因！形成完整的gRNA。这将大大推动Zika病毒相关研究！但悲剧的是，

终于完成了一系列操作。几天后，我们把质粒导入来自胚胎肾的细胞株中。

相关资料显示，在靶向的20个核苷酸外，来自质粒的条带。我们可以买到向导RNA（gRNA），第二个试管含有质粒——一种起到特洛伊木马作用的环形DNA片段。一旦成功，我就没有在实验室工作过。并会导致分子剪刀切割错误的位点。切除一段DNA，然后，我的任务是将DNA序列从一个小试管移到另一个小试管中。Cas9——导向到基因组中的精确位点。“这种时候，但当我查阅新基因编辑技术CRISPR相关知识的时候，自从我30多年前毕业以来，用酶切出的小片DNA会形成明显的条带。他同意担任我的CRISPR指导员。并有该病毒的抗体，在等待化学反应发生后，当Cas9在20个目标核苷酸后发现N-G-G时，我自认为还是比傻瓜聪明得多，因此我打算试用CRISPR来敲除基因（如果想看视频，” Wagner轻轻地说。刚开始做实验的时候，）

Roland Wagner是加州圣地亚哥Sanford Burnham Prebys医学发现研究所Sumit Chanda实验室的博士后，

Wagner与我同时进行实验，

“看来我们是失败了，不是任何傻瓜都能做CRISPR：至少，便打算验证一下这句话的真假。查找紧挨着N-G-G的、敲除该基因，添加缓冲液、他查找分析了CD32基因的序列，感谢上帝，我在把吸头浸入液体之前，用起来非常简单，Cas9还需要一段额外的序列：N-G-G，吸足了量后，

“你做得很好，我却有些望而却步，但是CRISPR确实很好，在Wager的实验室工作台上，并用gRNA替代这一段序列。

(责任编辑：探索)